Занятие №1

ЖЕЛУДОЧНЫЙ СОК

Желудочный сок представляет собой в норме бесцветную или беловатую жидкость, содержащую HCl (соляную кислоту), ферменты – протеазы и белки (гастромукопротеины и муцин).

Кроме того, он содержит соли калия, натрия, аммония, фосфаты, сульфаты и небольшое количество органических соединений (молочную кислоту, мочевину, креатинин, глюкозу).

Свободная HCl содержится в желудочном соке, полученном лишь в фазе «часового напряжения», т.е. после введения пробного завтрака или стимулятора. Она находится в виде свободно диссоциированных ионов H и Cl и в норме натощак не определяется.

Свойства свободной HCl.

1. Создаёт оптимум рН для ферментов желудка.

2. Активизирует протеазы.

3. Способствует набуханию коллоидов пищи, готовя их к гидролизу.

4. Оказывает бактерицидное действие.

5. Стимулирует моторную функцию желудка и кишечника.

6. Вместе с гастромукопротеином является антианемическим фактором.

7. Способствует всасыванию железа.

Протеазы (пепсин, гастриксин, желатиназа, химозин) – расщепляют белки.

Муцин – обволакивает слизистую желудка и предохраняет её от воздействия HCl и пепсина.

Способы получения желудочного сока

1. Одномоментное зондирование толстым зондом.

2. Фракционное зондирование тонким зондом.

Одномоментное зондирование проводится после дачи пробного завтрака Боаса-Эвальда (сухая белая булочка с чаем). При этом происходит условно-рефлекторное выделение «запального» сока на вид пищи и приём её.

Фракционное зондирование всегда проводят натощак. Шприцем извлекают содержимое желудка натощак (от 15 до 40 мл в норме), затем в течение часа каждые 15 минут откачивают содержимое желудка в отдельные пробирки (4 порции). После этого вводят либо энтеральный либо парэнтеральный раздражитель. В качестве энтерального лучше использовать 7% капустный отвар, а в качестве парэнтерального - пентагастрин.

После дачи энтерального раздражителя через 10 минут извлекают содержимое желудка и не исследуют его, затем через 15 минут ещё раз извлекают содержимое желудка, которое не исследуют (всего 25 минут).

Далее начинается фаза стимулирующей секреции или "часового напряжения", когда каждые 15 минут берут пробы на исследования. В норме в этой фазе должно увеличиваться количество секретируемого желудочного сока и повыситься его кислотность за счёт появления свободной HCl.

Каждую из 8 порций подвергают исследованию.

Исследование физических свойств желудочного сока

1. Количество: натощак 15-40 мл, после дачи раздражителя до 60 мл.

2. Цвет: в норме бесцветный или беловатый.

Примесь крови даёт буроватый или красноватый цвет или цвет "кофейной гущи". Примесь желчи - зеленоватый.

3. Запах: слегка кисловатый или без запаха.

Неприятный тухлый запах бывает при застое в желудке.

4. Состав желудочного сока

рН – 0,8-1,5

Органические вещества	Неорганические вещества
Протеазы: · Пепсин · Пепсин В · Гастриксин · Желатиназа Липаза Муцин Внутренний фактор Касла	Na K Ca Mg Cl HCO3 HPO4

5. Кислотность желудочного содержимого в титр.ед.

Общая HCl	Свободная HCl	Связанная HCl	К.О.
40-60	20-40	10-20	5-10

Определение молочной кислоты методом Уффельмана.

1. В химическую пробирку вносят 1-2 мл 1% раствора карболовой кислоты.

2. Добавляют 1-2 капли 10% раствора хлорного железа. Жидкость окрашивается в тёмно-фиолетовый цвет.

3. Содержимое пробирок разбавляют водой до светло-фиолетового цвета.

4. Разливают в две одинаковые пробирки: "опыт" и "контроль".

5. В опытную пробирку добавляют 1-2 капли исследуемого желудочного сока.

6. При положительной пробе в опытной пробирке по ходу капли сока появляется жёлтый след, а если молочной кислоты много - жёлтый цвет окрашивает всю жидкость.

7. При отрицательной пробе жидкости в опытной пробирке остаётся как в контроле.

Клинико-диагностическое значение:

В норме молочная кислота содержится в желудочном содержимом в ничтожных количествах и пробой Уффельмана не определяется.

Проба становится положительной при застое в желудке, связанном с отсутствием свободной HCl. Считают также, что молочная кислота является продуктом метаболизма раковых клеток.

Определение общей кислотности и её составных.

Общая кислотность желудочного сока состоит из свободной HCl, связанной HCl и кислотного остатка (суммы органических кислот).

Определяют кислотность желудочного сока методами титрования по Михаэлису и по Тепферу с помощью индикаторов фенолфталеина, диметиламидоазобензола и ализарин-сульфоновокислого натрия.

За общую кислотность принимается количество 0,1 N едкой щёлочи, пошедшее на титрование 100 мл профильтрованного желудочного сока. Поскольку мы берём для исследования 5 мл желудочного сока, полученную цифру умножаем на 20.

Принцип титрования заключается в реакции нейтрализации кислых компонентов желудочного сока 0,1 N раствором NaOH в присутствии индикаторов.

Индикатор на общую кислотность - 1% фенолфталеин

Индикатор на свободную HCl - 0,5% диметиламидоазобензол

Индикатор на связанную HCl - ализаринсульфоновокислый натрия

Титрование по Михаэлису

1. Бюретка устанавливается в штатив Бунзена, промывается дистиллированной водой и небольшим количеством 0,1 N NaOH.

2. Бюретка заполняется 0,1 N NaOH до уровня глаз с помощью воронки.

3. Из пипетки (носика) бюретки удаляется пузырёк воздуха путём сгибания носика под острым углом.

4. Снимается воронка и проверяется уровень щёлочи. Проследить, чтобы щёлочь не вытекала из носика вне титрования.

5. На столик штатива кладётся белая бумага.

6. В химический стаканчик наливаем 5 мл профильтрованного желудочного сока. Добавляем 1-2 капли 1% раствора фенолфталеина (в норме сок остаётся бесцветным).

7. После добавляем 1-2 капли 0,5% диметиламидоазобензола. При наличии свободной HCl сок приобретает красную окраску.

8. Отмечаем исходный уровень в бюретки и записываем его как 1-ё уровень.

9. Титруем желудочный сок до стойкого цвета "сёмги" (оранжево-розового) и отмечаем как 2-й уровень.

10. Титруем до лимонно-жёлтого цвета и отмечаем как 3-й уровень.

11. Титруем до стойкого малиново-розового цвета и отмечаем 4-й уровень.

Расчёт по Михаэлису:

Общая кислотность = (4 уровень - 1 уровень) х 20

Свободная HCl = (2 уровень - 1 уровень) х 20

Сумма свободной и связанной HCl = ((3 уровень + 4 уровень/2) - 1 уровень) х 20

Связанная HCl = сумма свободной и связанной HCl - свободная HCl

Кислотный остаток = общая кислотность - сумма свободной и связанной HCl

Нормы:

Общая кислотность 40-60 титрационных единиц

Свободная HCl 20-40 титрационных единиц

Связанная HCl 10-20 титрационных единиц

Кислотный остаток 4-10 титрационных единиц

Занятие №2

ИССЛЕДОВАНИЯ ЖЕЛУДОЧНОГО СОКА

Определение кислотности желудочного сока методом Тепффера

Принцип: определение концентрации свободной, связанной HCl, кислотного остатка и общей кислотности методом нейтрализации при титровании щёлочью в присутствии индикаторов, меняющих окраску в зависимости от рН среды.

Реактивы: 1% спиртовой раствор фенолфталеина, 0,5% спиртовой раствор диметиламидоазобензола, 0,5% раствор ализаринсульфоновокислый натрий.

Ход исследования:

1. В 2 стакана добавляют по 2 капли профильтрованного желудочного сока.

2. В 1-й стаканчик добавляют по 2 капли диметиламидоазобензола и фенолфталеина и проводят титрование по Михаэлису с определением общей кислотности и свободной HCl. Минуя лимонно-жёлтый цвет. Малиновый цвет отмечают как III уровень.

3. Во 2-й стаканчик добавляют 1 каплю ализаринсульфоновокислого натрия – желудочный сок окрашивается в светло-жёлтый цвет. Титруют до перехода жёлтого в светло-фиолетовый. Отмечают как IV уровень. В качестве исходного уровня для 2-го стаканчика берём уровень щёлочи, на котором закончили титрование в 1-м стаканчике – III уровень.

Расчёт:

По 1 стаканчику:

Общая кислотность = (III – I) x 20

Свободная HCl = (II – I) х 20

По 2 стаканчику:

Сумма свободной HCl и кислотного остатка = (IV – III) x 20

Кислотный остаток = сумма – свободная HCl

Связанная HCl = общая кислотность – сумма свободной HCl и кислотного ост

Исследование ферментообразующей функции методом Туголукова

Принцип: определение протеолитической активности желудочного сока по количеству расщеплённого белка.

Реактивы:

1. 2% раствор сухой плазмы на 0.1 Н растворе HCl.

2. 10% раствор трихлоруксусной кислоты.

Оборудо