ХИМИЯ ЛИПИДОВ

Обнаружение липидов

Качественные реакции на липиды дают возможность ознакомиться с некоторыми представителями этих соединений и их свойствами.

Реакция №1 « Акролеиновая проба (обнаружение глицеринсодержащих липидов)»

Принцип: в основе реакции лежит способность глицерина при нагревании терять воду и превращаться в акролеин – ненасыщенный альдегид с резким специфическим запахом.

С помощью этой реакции обнаруживают глицерин, входящий в состав нейтральных жиров и фосфолипидов.

Реакция №2 «Обнаружение лецитина в желтке куриного яйца»

Принцип: лецитины, относящиеся к группе фосфолипидов, не растворяются в воде и ацетоне, но хорошо растворяются в спирте, эфире, хлороформе.

Реакция №3 «Обнаружение холестерина»

Холестерин относится к стеринам и по химической природе представляет собой циклический ненасыщенный вторичный спирт. Холестерин может образовывать эфиры с высшими жирными кислотами.

Принцип: В основе реакций для обнаружения холестерина лежит способность образовывать окрашенные соединения в присутствии серной кислоты и уксусного ангидрида. Этой реакцией пользуются для количественного определения холестерина в крови.

Реактивы: 1) холестерин, 1% хлороформный раствор; 2) серная кислота, концентрированная; 3) уксусный ангидрид.

1. Реакция Сальковского.

Ход определения: в сухую пробирку вносят 10 капель раствора холестерина и осторожно по стенке пробирки наслаивают 0,5 мл серной кислоты. На границе жидкостей появляется красное кольцо.

2. Реакция Либермана-Бурхардта.

Ход определения: в сухую пробирку вносят 10 капель раствора холестерина, 5 капель уксусного ангидрида и 2 капли серной кислоты. Постепенно появляется сине-зелёное окрашивание.

Реакция №4 «Эмульгирование жира»

Для того, чтобы подвергнуться расщеплению под действием ферментов в ЖКТ жиры предварительно должны эмульгироваться. Эмульсия представляет собой дисперсную систему, состоящую из множества мелких капелек нерастворимой жидкости, например – жира, равномерно распределенных в жидкой фазе. Основными эмульгаторами жира в пищеварительном тракте являются желчные кислоты, а также белки, мыла и соли угольной кислоты, содержащиеся в некотором количестве в двенадцатиперстной кишке.

Принцип: взбалтывая жир с водой, можно наблюдать образование расслаивающейся, нестойкой эмульсии. Добавляя поверхностно-активные вещества, можно получить стойкую эмульсию. Эмульгаторы легко адсорбируются на поверхности раздела двух фаз, образуя тончайшую пленку, которая препятствует слиянию капелек эмульсии.

Реактивы: 1) растительное масло; 2) дистиллированная вода; 3) мыло, 1% раствор; 4) желчь; 5) яичный белок, 1% раствор; 6) карбонат натрия (сода), 1% раствор.

Ход определения: в 5 пробирок (предварительно пронумерованных) наливают по 3 капли растительного масла. В 1-ю пробирку добавляют 20 капель дистиллированной воды; во 2-ю пробирку – 20 капель желчи; в 3-ю – 20 капель мыла; в 4-ю – 20 капель яичного белка; в 5-ю – раствор карбоната натрия. Все пробирки предварительно взбалтывают. Через 5 минут оценивают сохранение эмульсии.

Указания к составлению отчета: результаты опыта занесите в таблицу, отмечая, образование эмульсии, её сохранность и степень дисперсности.

«Определение β-липопротеинов сыворотки крови турбидиметрическим методом»

Принцип: в присутствии хлористого кальция (CaCl₂) и гепарина нарушается коллоидная устойчивость белков сыворотки крови, в связи с чем β-липопротеины выпадают в осадок. Гепарин образует с липопротеинами комплекс, который под действием хлористого кальция выпадает в осадок. По степени мутности судят о концентрации β-липопротеинов в сыворотке.

Реактивы: 1) хлористый кальций: 0,025 М раствор (безводный СаCl₂ растворяют в дистиллированной воде или 28 мл ампульного хлорида кальция доводят в мерной колбе до 500 мл; реактив храниться в холодильнике); 2) гепарин в концентрации 1000 Ед/мл (аптечный гепарин концентрацией 5000 Ед/мл разводят дистиллированной водой: 1 мл гепарина и 4 мл воды).

Ход определения: В химическую пробирку наливают 2 мл хлористого кальция и добавляют 0,2 мл сыворотки, перемешивают. Вносят смесь в кювету (5 мм) ФЭКа, измеряют исходную оптическую плотность (Е₁) против раствора хлористого кальция, длина волны 630-690 нм. Содержимое переносят обратно в пробирку. В эту же пробирку вносят 0,04 мл разведенного гепарина. Ровно через 4 минуты фотометрируют пробу против хлористого кальция (Е₂).

Расчёт: содержание β-липопротеинов в сыворотки крови выражают в мг% или г/л.

(Е₂ – Е₁) х 1165 = мг% или (Е₂ – Е₁) х 11,65 = г/л

Норма: 250 – 600 мг% или 2,5 – 6,0 г/л

Общие липиды.

Липиды – это группа органических веществ, характеризующиеся нерастворимостью в воде (гидрофобностью), растворимостью в органических растворителях.

Группу «общих липидов» (ОЛ) плазмы составляют нейтральные жиры (ТГ), фосфолипиды, холестерин (ХС), эфиры ХС, гликолипиды, свободные жирные кислоты (СЖК).

Для количественного определения содержания ОЛ в сыворотке (плазме) крови применяют несколько групп методов, среди которых можно назвать гравиметрические, окислительные, турбидиметрические, методы, основанные на цветной реакции, развивающейся при взаимодействии продуктов распада ненасыщенных липидов с сульфофосфорновольфрамовым реактивом. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию ОЛ в сыворотке крови.

Определение концентрации общих липидов в сыворотки крови.

Принцип метода: ненасыщенные липиды и жирные кислоты, фосфолипиды и холестерин взаимодействуют после гидролиза серной кислоты с фосфованилиновым реактивом с образованием красного окрашивания.

Реактивы:

1. раствор ванилина (ванилин + ортофосфорная кислота)
2. стандартный раствор (8 г/л)
3. концентрированная серная кислота

Проведение анализа:

1. • Длина волны 510 – 550 нм
   • Кювета 1 см
   • Температура с +15 до +25 ⁰С

Расчет: С_оп = Е_оп/Е_ст х С_ст, где С_оп – концентрация пробы, С_ст – концентрация стандарта.

Норма: концентрация ОЛ составляет 4 – 8 г/л.

Примечание: отбор проб для определения общих липидов должны производиться минимально через 14 ч после последнего приема пищи.

Клинико-диагностическое значение:

Ø Гиполипидемия (гиполипемия) – уменьшение концентрации общих липидов в сыворотке (плазме) крови.

-Голодание;

- Нарушение переваривании и всасывания жиров;

- Гипертиреоз.

Ø Гиперлипидемия (гиперлипемия) - увеличение концентрации общих липидов сыворотке (плазмы) крови.

- Физиологическая: после еды (может наблюдаться через 1 – 4 часа после приема пищи); беременность, прием алкоголя.

- Патологическая:

- первичная (наследственная)

- вторичная: ожирение, цирроз печени, сахарный диабет, нефротический синдром, острый и хронический панкреатит.

Липурия – появление липидов в моче.