ФЕРМЕНТЫ

Раздел 1: «Обнаружение действия ферментов»

Реакция №1 «Ферментативный гидролиз крахмала»

Принцип: фермент слюны амилаза при определенных условиях производит гидролиз крахмала до мальтозы и глюкозы.

Примечание: обнаружение продуктов гидролиза проводят с помощью реакций с раствором йода и реакции Троммера.

Негидролизованный крахмал дает с йодом синее окрашивание (положительная реакция), глюкоза такого окрашивания не дает. Положительную реакцию Троммера (кирпично-красное окрашивание) дает глюкоза, тогда как крахмал такой реакции не дает.

Реактивы: 1) крахмал, 1% раствор; 2) слюна, водный раствор (ополоснуть рот водой, снова набрать в рот немного воды, поддержать 2 минуты, выпустить на приготовленный фильтр, фильтрат использовать для работы); 3) раствор йода, 1% в 2% растворе йодида калия; 4) сульфат меди, 5% раствор; 5) гидроокись натрия, 10% раствор.

Ход определения: берут две пробирки и номеруют, после чего в обе пробирки наливают по 10 капель раствора крахмала. Затем в 1-ю пробирку вносят 5 капель воды (контроль 1), в во 2-ю – 5 капель раствора слюны (опыт 2). Перемешивают и ставят в термостат при температуре 37⁰С для проведения гидролиза крахмала.

Через 15 минут достают пробирки из термостата и проводят реакции на обнаружения действия ферментов.

Из пробирки «контроль 1» отбирают 4 капли и переносят их в чистую пробирку («контроль 1.2»). С содержимым пробирки «контроль 1» проводят реакцию с йодом. С содержимым пробирки «контроль 1.2» проводят реакцию Троммера.

Из пробирки «опыт 2» отбирают 4 капли и переносят в чистую пробирку («опыт 2.2»). С содержимым пробирки «опыт 2» проводят реакцию с йодом. С содержимым пробирки «опыт 2.2» проводят реакцию Троммера.

Результаты работы оформляют в рабочей тетради в виде таблицы

Таблица 1 «Гидролиз крахмала амилазой слюны»

Раздел 2: «Свойства ферментов»

Реакция №2 «Специфичность действия ферментов»

Принцип: Ряд ферментов осуществляет расщепление строго определённых веществ, т.е. обладают абсолютной специфичностью. Однако, большинство ферментов имеет относительную специфичность – расщепляют группу веществ, имеющих одинаковый тип связи в молекуле (пептидные, эфирные и др.).

Специфическим субстратом для фермента амилазы является крахмал, для фермента сахаразы – сахароза.

Реактивы: 1) крахмал, 1% раствор; 2) сахароза, 2% раствор; 3) слюна, водный раствор; 4) сахараза из дрожжей, раствор (1 г дрожжей растирают в ступке с 2 г стеклянного песка, приливают 97 мл дистиллированной воды и 2 мл толуола, раствор фильтруют); 5) раствор йода 1%; 6) сульфат меди 5% раствор; 7) гидроокись натрия, 10% раствор.

Опыт 1 «Определение специфичности амилазы».

Ход определения: Берут 2 пробирки и добавляют по 4 капли раствора слюны в каждую. В 1 –ю пробирку («крахмал 1») вносят 10 капель раствора крахмала. Во 2-ю пробирку («сахароза 1») вносят 10 капель раствора сахарозы. Содержимое каждой пробирки перемешивают и ставят в термостат на 15 минут при температуре 37⁰С, после чего достают пробирки из термостата и проводят реакции, доказывающие специфичность действия фермента (амилазы).

С содержимым пробирок выполняют реакцию с раствором йода (крахмал 1; сахароза 1) и реакцию Троммера (крахмал 1.2; сахароза 1.2).

Результаты работы оформляют в рабочей тетради в виде таблицы

Таблица 2 «Гидролиз крахмала амилазой слюны»

Опыт 2 «Определение специфичности сахаразы».

Ход определения: Берут 2 пробирки и добавляют по 4 капли раствора сахаразы в каждую. В 1 –ю пробирку («крахмал 1») вносят 10 капель раствора крахмала. Во 2-ю пробирку («сахароза 1») вносят 10 капель раствора сахарозы. Содержимое каждой пробирки перемешивают и ставят в термостат на 15 минут при температуре 37⁰С, после чего достают пробирки из термостата и проводят реакции, доказывающие специфичность действия фермента (сахаразы).

С содержимым пробирок выполняют реакцию с раствором йода (крахмал 2; сахароза 2) и реакцию Троммера (крахмал 2.2; сахароза 2.2).

Результаты работы оформляют в рабочей тетради в виде таблицы

Таблица 3 «Гидролиз крахмала сахаразой»

Реакция №3 «Влияние температуры на активность ферментов»

Принцип: Ферменты термолабильны и проявляют оптимальную активность при температуре 35 – 45 ⁰С. При повышении температуры свыше 50 ⁰С их активность снижается, а затем происходит разрушение структуры молекулы фермента.

Реактивы: 1) крахмал, 1% раствор; 2) слюна, водный раствор; 3) слюна, прокипяченная; 4) раствор йода 1%; 5) сульфат меди 5% раствор; 6) гидроокись натрия, 10% раствор.

Ход определения: в 2 пробирки вносят по 10 капель раствора крахмала. В 1-ю пробирку добавляют 5 капель раствора слюны, во 2-ю пробирку 5 капель раствора прокипяченной слюны. Пробирки встряхивают, и помещают их в термостат на 15 минут при температуре 37⁰С, после чего достают пробирки из термостата. Охлаждают их и проделывают реакции с раствором йода (крахмал 1; крахмал 2) и реакцию Троммера (крахмал 1.2; крахмал 2.2).

Результаты работы оформляют в рабочей тетради в виде таблицы

Таблица 4 «Влияние температуры на активность ферментов»

Реакция №4 «Влияние рН среды на активность фермент… Продолжение »