Принцип: Для амилазы слюны оптимальное значение рН среды – 6,8. В кислой и щелочной среде активность ее снижается, и расщепление крахмала происходит не полностью, до стадии декстринов, которые с раствором йода дают красно-фиолетовую или красно-бурую окраску.

Реактивы: 1) крахмал, 1% раствор; 2) слюна – раствор, разведенный в 10 раз; 3) дистиллированная вода; 4) хлористоводородная кислота, 0,2%; 5)раствор йода 1%.

Ход определения: в 8 пронумерованных пробирок наливают по 1 мл дистиллированной воды. В 1-ю пробирку вносят 1 мл раствора соляной кислоты, перемешивают, отбирают из этой пробирки 1 мл смеси и переносят его во 2-ю пробирку. Содержимое 2-й пробирки перемешивают, отбирают 1 мл полученной смеси и переносят в 3-ю пробирку и т.д. Из 8 пробирки 1 мл смеси выливают. Таким образом, в пробирках получают разведения соляной кислоты в убывающей концентрации, соответствующей различным значениям рН среды. После этого в каждую пробирку добавляют по 2 мл раствора крахмала и по 1 мл раствора слюны . Пробирки встряхивают и помещают в термостат на 15 минут при температуре 37⁰С. Затем пробирки охлаждают под проточной водой и добавляют по 1 капле раствора йода. Отмечают, при какой концентрации соляной кислоты (рН среды) произошел полный гидролиз крахмала.

Раздел 3: «Регуляция активности ферментов»

Вещества, усиливающие активность ферментов, называют активаторами, а угнетающие скорость ферментативных реакций – ингибиторами. Ингибирование может проходить по конкурентному типу (изостерическое), когда в результате сходства химической структуры и пространственной конфигурации ингибитора и субстрата возможно присоединение ингибитора к активному центру фермента, и по неконкурентному типу (аллостерическое). Последний тип наблюдается в том случае, если ингибитор присоединяется не к активному центру фермента, а к другому специфическому участку молекулы. При этом в результате изменения конформации белковой молекулы в целом изменяется конформация активного центра, который становится недоступным для субстрата.

Реакция №5 «Влияние активаторов и ингибиторов на активность ферментов»

Принцип: активаторы и ингибиторы влияют на активный центр ферментов, способствуют его активации или блокированию.

Реактивы: 1) крахмал, 1% раствор; 2) слюна, водный раствор, разведенный в 5 раз; 3) хлорид натрия, 1% раствор; 4) раствор йода 1%; 5) сульфат меди, 1% раствор; 6) дистиллированная вода.

Ход определения: в 3 пробирки отмеривают по 10 капель раствора слюны. Затем добавляют по одной капле: в 1-ю – хлорид натрия, во 2-ю – сульфат меди, в 3-ю – воды (контроль). Перемешивают, вносят в каждую пробирку по 5 капель раствора крахмала и оставляют на 3 минуты при комнатной температуры. Затем добавляют по 1 капле раствора йода, перемешивают, наблюдают за окраской растворов и определяют, в какой пробирке действовал активаторов или ингибиторов.

Результаты работы оформляют в рабочей тетради в виде таблицы

Таблица 5 «Действие активатора и ингибитора на активность амилазы»